中和实验

抗体中和细胞因子诱导细胞因子产生

1、材料
指示细胞系(见速查表针对给定的细胞因子)
培养基:RPMI1640+10%FBS。
96孔板(平底)(Costar Cat.No.3595)
细胞因子ELISA配对或ready-set-go kit

2、仪器
吸管和移液器
恒湿培养箱
96孔微孔检测分光光度计

3、持续时间
孵育时间24-48小时
测定样品准备时间1小时

4、实验步骤
(1)向96孔板每孔中加50ul培养基1640.
(2)使用两倍的连续稀释液从第3排到第12排依次稀释功能级别的抗细胞因子抗体(见速查表标准范围),留1,2排不加。
(3)2排到12排每孔加50ul重组细胞因子和样品(浓度见速查表,第二排是细胞因子和指示细胞组,1排是只有细胞的对照组)。
(4)1640培养基洗指示细胞三次,重悬调整细胞浓度到2-3.5×105/ml(见速查表)。
(5)每孔加100ul细胞悬液。
(6)37度 5%CO2 恒湿培养箱培养24-48小时。
(7)收获上清ELISA检测细胞因子。
(8)绘制标准曲线分析数据。

细胞因子检测速查指南表(human and mouse):

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