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调节荧光补偿的利器——荧光补偿微球

日期:2015年4月30日 浏览次数:4,909

eBioscience荧光补偿微珠是球状的,可以和荧光抗体结合,作为流式实验的补偿对照。

抗体捕获微珠分为阳性和阴性,阳性微珠能捕获所有的小鼠、大鼠或仓鼠抗体,阴性微珠不会和抗体反应。当荧光共轭抗体加到微珠上,就可以区分出阴阳性微珠,阳性微珠可以作为多色流式实验的单色补偿对照。

 

优点:

u  通常荧光都比样本表达要强

u  CV值小,几乎没有背景荧光

u  和你实际染色的荧光抗体结合

u  不需要使用珍贵的样本

u  使用简单

 

OneComp eBeads和小鼠、大鼠、仓鼠的免疫球蛋白轻链反应,对488nm蓝色,532nm绿色,561nm黄绿色和633 - 640 nm红色激光所激发的荧光染料的光谱进行补偿。可兼容eFluor® 450,但是对405 nm紫色激发的光谱不能很好的补偿。

UltraComp eBeads 和小鼠、大鼠、仓鼠的免疫球蛋白轻链反应,能对355nm紫外,405nm紫色,488nm蓝色,532nm绿色,561nm黄绿色和633 - 640 nm红色激光所激发的荧光染料的光谱进行补偿。

                  

将流式常用的13种不同的PE(见左图),eFluor450(见右图)共轭单克隆抗体和UltraComp eBeads混匀,Beads捕获0.25 ug抗体后上流式细胞仪分析,每个直方图代表一种染色抗体(图右边是克隆和同型)。

 

实验所需材料:

12x75 mm 圆底试管 

直标抗体

流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222) 

 

实验操作流程:

准备单色补偿对照

1、  每种荧光染料标记一个管。

2、  微珠通过反复颠倒或涡旋混匀,混匀时间不低于10min。

3、  每个管里加一滴UltraComp eBeads。

4、  每个管里加少量共轭抗体。

5、  用移液枪吸打或涡旋短暂混匀。

6、  2-8℃避光孵育15-30min。

7、  每管加2mL流式染色缓冲液后400-600 ×g离心3-5min。

8、  弃去上清液,加0.2-0.4mL流式染色缓冲液。

9、  分析前用移液枪抽打或涡旋短暂混匀。

 

 

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