实验方案

7-AAD和PI：

Propidium Iodide Staining Solution (cat. 00-6990)

7-AAD Viability Staining Solution (cat. 00-6993)

(1) 标记细胞表面标志之后，用流式染色液洗涤细胞1-2次。

(2) 离心弃上清，用适量的流式染色液重悬细胞。

(3) 每100ul加5ul 7-AAD或PI（具体用量可以预实验摸索）。

(4) 室温或冰上避光孵育5-15分钟（时间按照预实验摸索）。

注意：

1． 加入7-AAD和PI后不用洗涤。

2． 加入染料后必须尽快实验分析，以免影响结果。

钙黄绿素

Calcein AM (cat. 65-0853)

Calcein Violet AM (cat. 65-0854)

Calcein Blue AM (cat. 65-0855)

钙黄绿素是冻干粉，使用前要用无水DMSO重悬试剂，重悬后要在短期内尽快用完，短期分装储存于-20度，避免反复冻融和使用前平衡至室温。

1. 准备细胞，用流式染色液调整细胞浓度为5×10⁶ /ml，加入适量的钙黄绿素（工作浓度依照预实验结果进行或说明书建议用量）。

2. 室温孵育30min，流式染色液洗涤2次。

3. 进行细胞表面染色和后续的分析。

eBioscience® Fixable Viability Dyes

Fixable Viability Dye eFluor® 450 (cat. 65-0863)

Fixable Viability Dye eFluor® 660 (cat. 65-0864)

Fixable Viability Dye eFluor® 780 (cat. 65-0865)

上述染料不能用于含有叠氮钠或FBS/血清的PBS中；为了染色均匀，应使细胞悬液体积不小于0.5ml。

1. 准备细胞，PBS洗涤2次。

2. 调整细胞浓度为1-5×10⁶ /ml，每毫升加1ulFixable Viability Dyes 迅速斡旋混匀。

3. 2-8度避光孵育30min。

4. 流式细胞染色液洗涤2次。进行固定和破膜操作。

注意：该染料可以在表面染色前或后进行染色，Fixable Viability Dyes染色后可以低温储存一段时间再进行检测，所以可以满足研究者的不同要求。